森の里ホームズのブログ

リン酸化特異的抗体

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 タンパク質のリン酸化は、セリン、スレオニン、またはチロシン残基にリン酸基が付加されることであり、細胞シグナルを膜から核に伝達するために利用される重要な細胞プロセスです。タンパク質のリン酸化は、酵素の活性化または不活性化のきっかけとなる構造変化を引き起こす可能性があります。

リン酸化特異的抗体は、タンパク質のリン酸化体のみを検出する一次抗体で、リン酸化されたセリン、スレオニン、チロシン残基を識別します。一般的なリン酸化タンパク質の評価は、ターゲットの全タンパク質(リン酸化されたタンパク質とリン酸化されていないタンパク質の両方を認識する一次抗体を使用)と、リン酸化特異的な抗体を用いて検出することでタンパク質のリン酸化の割合が評価されます。

リン酸化特異的抗体を使用する前に、その抗体が実験系で検証されていることを確認してください。そのためには、ポジティブコントロールとネガティブコントロールを使用することが必要です。例えば、未処理または目的のシグナル経路を刺激するように処理した細胞のライセートは、ネガティブおよびポジティブコントロールとして機能します。同様にリン酸基を除去するためにフォスファターゼで処理されたライセートは、ネガティブコントロールとして使用することができます。
 

 ⇒ トランスフェクション(transfection)


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